二抗选取需考虑方面

      二抗是指用于靶向结合一抗的抗体。在多种免 疫印迹、ELISA以及免 疫荧光等免 疫实验中，二抗经常和一抗结合使用以检测目标蛋白。很多二抗都带有标记物，例如Alexa Fluor荧光染料或辣根过氧化物酶（HRP），从而使二抗的信号可以被检测到。

      实验中也可以使用带有标记物的一抗，但是二抗有很多优点。无论是使用哪种一抗进行检测，使用二抗可便于更换不同的标记物。例如，同样的一抗可以与HRP标记二抗一起用于免 疫印迹，也可以与另一种Alexa Fluor 488荧光标记二抗一起用于免 疫荧光实验。

      另外，二抗结合在抗原位置的标记染料比直标一抗要多，从而增强检测信号。使用二抗可以避免对一抗进行复杂且昂贵的化学标记（偶联），而且偶联反应（具有氨基酸特异性）可能干扰一抗对抗原的识别。

      二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免 疫学实验中得以广泛应用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性，因而使用特定标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。

      二抗，广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从以下几个方面考虑：

1.一抗的种属来源

根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如：一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。

2.一抗的类别亚型

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免 疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。单克隆抗体的类别及亚型通常会在产品说明书中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗。此种抗体在双标记实验中尤其合适。

3.二抗的藕联标记

一般来讲，藕联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP）、荧光基团、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。WB和ELISA常用的二抗是酶标二抗，而免 疫荧光实验中通常使用荧光基团标记的二抗，而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免 疫电镜中。