一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ014295 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ014295 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ014295 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:VTG
中文名称:鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体
别 名;vitellogenin.
研究领域;细胞生物
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
产品应用;ELISA=1:5000-10000
IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;VTG protein: full length
vitellogenin from Medaka serum
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA,
0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is
intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic
applications.
卵黄蛋白原(Vitellogenin,VTG)是由卵生脊椎动物肝细胞合成的一种复杂大分子蛋白,是由雌诱导在肝脏中表达的脂蛋白—卵黄蛋白的前体。成熟雌鱼在体内雌17β-雌二醇的刺激下由肝脏合成,经过血液运输到达卵巢并加工成卵黄蛋白。雄鱼在正常情况下不合成这种蛋白,但受到雌(内源或外源)刺激也可合成这种蛋白,由于没有卵巢有效地VTG,雄鱼血液中VTG浓度会升高。因此,通过检测VTG含量可以反映外界化合物的类雌作用及作用效应水平。
目前水生生物VTG已作为水中环境雌污染的重要生物标志。用于检测VTG的方法很多,包括:组织化学 ELISA法、色谱法、印记、原位杂交等。
产品介绍:
卵黄蛋白原(Vitellogenin,VTG)是由卵生脊椎动物肝细胞合成的一种复杂大分子蛋白,是由雌诱导在肝脏中表达的脂蛋白—卵黄蛋白的前体。成熟雌鱼在体内雌17β-雌二醇的刺激下由肝脏合成,经过血液运输到达卵巢并加工成卵黄蛋白。雄鱼在正常情况下不合成这种蛋白,但受到雌(内源或外源)刺激也可合成这种蛋白,由于没有卵巢有效地VTG,雄鱼血液中VTG浓度会升高。因此,通过检测VTG含量可以反映外界化合物的类雌作用及作用效应水平。
目前水生生物VTG已作为水中环境雌污染的重要生物标志。用于检测VTG的方法很多,包括:组织化学 ELISA法、色谱法、印记、原位杂交等。
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
大鼠神经型一氧化氮合酶(NOS1)elisa检测试剂盒 |
前列腺肿瘤高表达蛋白1抗体 Anti-PTOV1 |
致死因子恶性脑瘤样蛋白1抗体 |
阴离子转运蛋白-1抗体 Anti-OAT-1/SLC22A6 |
L3MBTL1 |
FRA-1蛋白抗体 |
B细胞瘤因子9抗体 |
FRA1 |
小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)elisa检测试剂盒 |
磷酸化神经突触素1抗体 Anti-phospho-SYN1(Ser553) |
BCL9 |
DNA甲基转移酶2抗体 |
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP3A1(BROD)活性 |
Dnmt2 |
大鼠五聚素3(PTX3)elisa检测试剂盒 |
硝基化α-突触核蛋白 Anti-nitrated Alpha-synuclein (nitro-Tyr39) |
?COLLAGEN III蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
Rab溶酶体相互作用蛋白样2抗体 Anti-RILPL2 |
核转录因子YB抗体 |
信号通路WNT10B抗体 Anti-WNT12/WNT10B |
NFYB |
凝血酶(凝血因子II)激活肽2抗体 Anti-Thrombin Activation peptide fragment 2 |
7号染色体开放阅读框44抗体 |
大鼠白介素23(IL-23)elisa分析检测试剂盒 |
C7orf44 |
IL-23 ELISA Kit |
胸腺素β10抗体 Anti-T Beta 10 |
人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)elisa分析检测试剂盒 |
鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体Rel B; I REL; IREL; Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B cells 3; RelB; Reticuloendotheliosis viral oncogene homolog B; Transcription factor RelB; v rel avian reticuloendotheliosis viral oncogene homolog; v rel reticuloendotheliosis viral oncogene homolog B; RELB_HUMAN; I-Rel. |