ELISA包被和封闭的原理

ELISA包被和封闭的原理：

实验时，需要将抗原或捕获抗体包被于固相载体上，通过检测分子（酶或荧光基团），将化学信号转换为电信号，以OD值或发光值的结果，对靶蛋白进行定量分析。

ELISA 中的固相载体物很多，常用的是聚苯乙烯，具有较强的蛋白质吸附性。具有可制成各种形式，且不参与化学反应的特点。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯，它质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。除塑料制品外，固相酶免 疫测定的载体还有两种材料：一是微孔滤膜；另一种载体是以含铁的磁性微粒制作的。

在 ELISA 中，抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键。ELISA 所用抗原有三个来源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物等，一般含有多种抗原成分，需经纯化。重组抗原和多肽抗原均为人工合成品，使用安 全，而且纯度高，干扰少的优势。但制备的技术难度较大，制备成本高。

将抗原或抗体固相化的过程称为包被。因为载体的物质不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯 ELISA 板为载体时，需将抗原或抗体溶于缓冲液中，加于 ELISA 板孔中在 4℃ 过夜。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面能被此蛋白质完全覆盖，后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，后产生非特异性显色，导致本底值偏高。在这种情况下，需要在包被后用牛血清白蛋白再包被一次，消除干扰，这一过程也被称为封闭。

通常包被和封闭都是在生产时由厂家完成的，只需要知道原理即可，实验时无需操作。