原代细胞培养的具体操作步骤:
1.组织处理:将动物组织从机体中取出,剪碎后用胰蛋白酶等消化酶处理,使其分散成单个细胞。
2.细胞计数:使用血细胞计数器或其他方法对细胞进行计数,确保细胞密度适中。
3.接种培养:将细胞悬液接种到培养瓶中,加入适量的培养基,置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4.换液和传代:定期更换培养液,当细胞达到一定密度时进行传代培养,以维持细胞的生长状态。
组织来源
前列腺
货号
P-X2088
产品规格
5×105
生长特性
贴壁
产品类别
兔原代细胞
细胞形态
上皮细胞样
兔前列腺上皮细胞分离自前列腺组织;前列腺(Prostate)是雄性的性腺器官;前列腺是不成对的实质性器宫,由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子,底朝上,与膀胱相贴,尖朝下,抵泌尿生殖膈,前面贴耻骨联合,后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过,扼守着尿道上口,所以,前列腺有问题时,排尿首先受影响。前列腺是机体非常少有的,具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺,前列腺每天分泌前列腺液,是构成精液主要成分;作为腺,前列腺分泌的称为“前列腺素”。前列腺上皮细胞与前列腺的功能关系密切,上皮细胞的损伤是前列腺炎的主要病症,重度的前列腺炎患者的前列腺液内可检测到脱落的上皮细胞,这是上皮细胞损伤的标志。炎症发生时,与炎症相关的一些炎症因子可能发生变化。因此,体外培养前列腺上皮细胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等的前提和基础。前列腺主要特征如下:①前列腺结构和功能活动均受雄性的调控;②基底细胞主要表达高分子量细胞角蛋白(CK-5、CK-14),基底上皮细胞可分化成管腔上皮细胞;③前列腺上皮细胞的培养为研究前列腺的许多重要特性以及化学和性致癌作用提供了机会。
方法简介:
实验室分离的兔前列腺上皮细胞采用先中性蛋白酶消化、后胶原酶-胰蛋白酶联合消化并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:实验室分离的兔前列腺上皮细胞经PCK荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养信息:包被条件:鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基:含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:上皮细胞样
传代特性:可传1-2代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
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原代培养与传代培养的区别:
1. 细胞来源
原代培养:原代培养是指从生物体组织中直接分离出的细胞进行的培养。这些细胞通常来自活检样本或手术摘除的组织。原代培养的细胞尚未经过任何实验室的人工选择或适应。组织传代培养:传代培养指的是经过初次分离培养后的细胞,在体外环境中经过多次分裂和增殖后的细胞。这些细胞已经适应了人工培养条件,并可以通过传代方式多次增殖。
2. 培养过程
原代培养:原代培养的过程通常包括组织的解离、细胞的分离、种植和培养等步骤。原代细胞培养的目的是获得足够数量的细胞,以进行进一步的实验研究或建立稳定的细胞系。
传代培养:传代培养的过程涉及到将已经适应体外培养条件的细胞从培养容器中分离出来,然后重新种植到新的培养容器中进行进一步培养。传代培养通常需要在细胞达到一定密度或出现接触抑制时进行。
3. 细胞特性
原代培养:原代细胞通常具有更接近自然状态下的生物学特性,包括基因表达、酶活性、信号传导等。这些特性使得原代细胞成为研究生理和病理条件下细胞行为的重要工具。
传代培养:传代细胞由于长期在体外环境中生长,可能会发生一些生物学特性的改变。这些改变可能包括基因表达的变化、细胞形态的变异、生长速率的增加等。因此,传代细胞可能需要进行鉴定和验证,以确保其仍具有所需的生物学特性。
4.培养结果
原代培养:所获得的细胞在形态结构和功能活动上与体内原组织相似性大,更接近于生物体内的生活状态。这种培养方法常用于研究细胞在生理状态下的生长、代谢和繁殖。
传代培养:由于细胞已适应体外环境并且增殖速度快,传代培养一般适用于获得大量同种细胞以满足实验需求,如构建组织工程产品、筛选和毒性测试等。5. 应用领域
原代培养:原代细胞通常用于筛选、毒理学测试、模型研究等领域。由于其保留了生物体的自然特性,因此被认为是更接近体内条件的模型系统。
传代培养:传代细胞被广泛用于各种生物学研究,包括基因表达调控、信号转导、细胞周期调控等。传代细胞系的稳定性和一致性使得它们成为研究细胞生物学机制的理想模型。
6. 注意事项
原代培养:需要严格控制无菌条件,避免细胞污染;注意细胞的存活率和纯度,避免其他类型细胞的混杂;以及考虑细胞在体外环境下可能发生的表型和基因型改变。
传代培养:需要关注细胞的生长状态和形态变化,定期检查细胞是否存在污染或变异;注意传代次数,因为过多的传代可能导致细胞老化或转化。
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原代细胞培养的注意事项:
一、在进行原代细胞培养时,需要注意以下几点:
二、无菌操作:整个过程需要在无菌条件下进行,以防止污染。
三、细胞融合和传代:跟踪细胞的融合状态,适时进行传代,避免细胞分化。
四、冷冻保存和复苏:对于需要长期保存的细胞,可以进行冷冻保存,并注意复苏时的操作细节。
五、培养基的选择和更换:根据细胞类型选择合适的培养基,并定期更换以保证营养充足。