原代细胞培养的具体操作步骤：
1.组织处理：将动物组织从机体中取出，剪碎后用胰蛋白酶等消化酶处理，使其分散成单个细胞。
2.细胞计数：使用血细胞计数器或其他方法对细胞进行计数，确保细胞密度适中。
3.接种培养：将细胞悬液接种到培养瓶中，加入适量的培养基，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4.换液和传代：定期更换培养液，当细胞达到一定密度时进行传代培养，以维持细胞的生长状态。
产品货号
P-X1609
产品规格
5×105
组织来源
胰腺组织
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
产品类别
大鼠原代细胞
传代特性
可传2-3代
用途
仅供科研
大鼠胰腺星状细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）。PSC具有静息态与激活态两种，并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的维生素A脂滴可以被油红O染成红色，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现，原代分离的细胞培养6d，胞浆中仍可见明显的脂滴，传代后，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程，至培养第6d大多数细胞激活，传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化，导致细胞形态、功能发生变化，促使基质、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。
方法简介：
公司实验室分离的大鼠胰腺星状细胞采用胶原酶制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
公司实验室分离的大鼠胰腺星状细胞经α-SMA、Desmin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
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原代培养与传代培养的区别：
1. 细胞来源
原代培养：原代培养是指从生物体组织中直接分离出的细胞进行的培养。这些细胞通常来自活检样本或手术摘除的组织。原代培养的细胞尚未经过任何实验室的人工选择或适应。组织传代培养：传代培养指的是经过初次分离培养后的细胞，在体外环境中经过多次分裂和增殖后的细胞。这些细胞已经适应了人工培养条件，并可以通过传代方式多次增殖。
2. 培养过程
原代培养：原代培养的过程通常包括组织的解离、细胞的分离、种植和培养等步骤。原代细胞培养的目的是获得足够数量的细胞，以进行进一步的实验研究或建立稳定的细胞系。
传代培养：传代培养的过程涉及到将已经适应体外培养条件的细胞从培养容器中分离出来，然后重新种植到新的培养容器中进行进一步培养。传代培养通常需要在细胞达到一定密度或出现接触抑制时进行。
3. 细胞特性
原代培养：原代细胞通常具有更接近自然状态下的生物学特性，包括基因表达、酶活性、信号传导等。这些特性使得原代细胞成为研究生理和病理条件下细胞行为的重要工具。
传代培养：传代细胞由于长期在体外环境中生长，可能会发生一些生物学特性的改变。这些改变可能包括基因表达的变化、细胞形态的变异、生长速率的增加等。因此，传代细胞可能需要进行鉴定和验证，以确保其仍具有所需的生物学特性。
4.培养结果
原代培养：所获得的细胞在形态结构和功能活动上与体内原组织相似性大，更接近于生物体内的生活状态。这种培养方法常用于研究细胞在生理状态下的生长、代谢和繁殖。
传代培养：由于细胞已适应体外环境并且增殖速度快，传代培养一般适用于获得大量同种细胞以满足实验需求，如构建组织工程产品、筛选和毒性测试等。5. 应用领域
原代培养：原代细胞通常用于筛选、毒理学测试、模型研究等领域。由于其保留了生物体的自然特性，因此被认为是更接近体内条件的模型系统。
传代培养：传代细胞被广泛用于各种生物学研究，包括基因表达调控、信号转导、细胞周期调控等。传代细胞系的稳定性和一致性使得它们成为研究细胞生物学机制的理想模型。
6. 注意事项
原代培养：需要严格控制无菌条件，避免细胞污染；注意细胞的存活率和纯度，避免其他类型细胞的混杂；以及考虑细胞在体外环境下可能发生的表型和基因型改变。
传代培养：需要关注细胞的生长状态和形态变化，定期检查细胞是否存在污染或变异；注意传代次数，因为过多的传代可能导致细胞老化或转化。
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原代细胞培养的注意事项：
一、在进行原代细胞培养时，需要注意以下几点：
二、无菌操作：整个过程需要在无菌条件下进行，以防止污染。
三、细胞融合和传代：跟踪细胞的融合状态，适时进行传代，避免细胞分化。
四、冷冻保存和复苏：对于需要长期保存的细胞，可以进行冷冻保存，并注意复苏时的操作细节。
五、培养基的选择和更换：根据细胞类型选择合适的培养基，并定期更换以保证营养充足。