一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ012138 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ012138 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ012138 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
英文名称:PAPSS1
中文名称:腺苷酸硫酸激酶1抗体
别 名;Adenylyl-sulfate kinase; Adenylylsulfate 3''-phosphotransferase; APS kinase; ATP-sulfurylase; ATPSK 1; ATPSK1; Bi
产品介绍:
Bifunctional enzyme with both ATP sulfurylase and APS kinase activity, which mediates two steps in the sulfate activation pathway. The first step is the transfer of a sulfate group to ATP to yield adenosine 5'-phosphosulfate (APS), and the second step is the transfer of a phosphate group from ATP to APS yielding 3'-phosphoadenylylsulfate (PAPS: activated sulfate donor used by sulfotransferase). In mammals, PAPS is the sole source of sulfate; APS appears to be only an intermediate in the sulfate-activation pathway. Also involved in the biosynthesis of sulfated L-selectin ligands in endothelial cells.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
ACA-IgGELISAKit |
TNF ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 |
大鼠CDCP1 elisa分析检测试剂盒 |
小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa检测试剂盒 |
CDCP1 ELISA kit |
原钙粘附蛋白17抗体 |
人高密度脂蛋白3(HDL3)elisa分析检测试剂盒 |
PCDH17 |
大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)elisa检测试剂盒 |
caspase-2活性检测试剂盒分光光度法 20T、50T、100T |
HDL3ELISAKit |
缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶4抗体 |
组织琥珀酸脱氢酶(SDH)活性比色法定量检测试剂盒 |
HIF Prolyl Hydroxylases |
通用型猪布病基因检测试剂盒 |
p21激活激酶1抗体 Anti-PAK1 |
糖化血清蛋白GSP试剂盒NBT法 96T 微板法 |
磷酸甲羟戊酸激酶抗体 Anti-PMVK |
组织相容性抗原H抗体 |
马铃薯球蛋白(结节性硬化)抗体 Anti-Tuberin/TSC2 |
HLA-H |
神经颗粒蛋白5抗体 Anti-Sg V/Secretogranin V |
突触融合结合蛋白6抗体 |
Cy3标记的小鼠抗羊IgG H&L |
Amisyn |
Mouse Anti-Goat IgG H&L / Cy3 |
大鼠胰高血糖素样肽1(Glp-1)elisa检测试剂盒 |
FDXACB1蛋白抗体 |
腺苷酸硫酸激酶1抗体High mobility group protein B1; Amphoterin; High mobility group 1; High Mobility Group Box 1; High mobility group protein 1; HMG3; HMGB 1; HMGB-1; Hmgb1 protein; Nonhistone chromosomal protein HMG1; SBP 1; SBP-1; Sulfoglucuronyl carbohydrate binding protein; HMGB1_HUMAN. |