一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ006221 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ006221 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ006221 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
英文名称:Cytokeratin 4
中文名称:细胞角蛋白4抗体
别 名;CK 4; CK4; CYK 4; CK-4; CYK4; Cytokeratin4; Cytokeratin-4; FLJ31692; K4; Keratin 4; Keratin-4; Keratin type II cytoskeletal 4; Keratin4; KRT 4; KRT4; K2C4_HUMAN; Keratin, type II cytoskeletal 4; K4; Type-II keratin Kb4.
研究领域; 信号转导 上皮细胞
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Rat, (predicted: Mouse, Dog, Cow, Horse, Rabbit, )
产品应用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1ug/test IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;57kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human CK4: 256-360/594
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
Heterotetramer of two type I and two type II keratins. Keratin-4 is generally associated with keratin-13.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
Lptn/LTNELISAKit |
小鼠抗心肌抗体(AMA)elisa检测试剂盒 |
大鼠Na-K-ATP酶elisa分析检测试剂盒 |
视黄醇结合蛋白RBP试剂盒 R1:45ml×1 R2:15ml×1 浊度法 |
Rat Na+/K+-ATPase ELISA kit |
OSTC蛋白抗体 |
人骨成型蛋白7(BMP-7)elisa分析检测试剂盒 |
OSTC |
CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒500T |
聚甲基半乳糖醛酸酶(Polymethylgalacturonase;PMG)活性比色法定量检测试剂盒 |
HumanBMP-7ELISAKit |
钙离子通道a1F亚型抗体 |
小鼠NADH脱氢酶1(ND1)elisa检测试剂盒 |
CACNA1F |
冰冻切片组织TNF ALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
前列腺特异膜抗原抗体 Anti-PMS/FOLH1/PMSA |
大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)elisa检测试剂盒 |
中心粒周蛋白抗体 Anti-PCNT/Pericentrin |
猕猴骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)elisa分析检测试剂盒 |
按蚊硫酯包含蛋白-1抗体 Anti-Thioster-containing protein 1 |
ALP-B ELISA Kit |
丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白4抗体 Anti-SRRM4 |
人白介素1受体相关激酶-4(IRAK-4)elisa分析检测试剂盒 |
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgG H&L |
HumanIRAK-4ELISAKit |
Mouse Anti-Human IgG H&L / HRP |
大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)elisa检测试剂盒 |
核小体蛋白SP140样蛋白抗体 |
细胞角蛋白4抗体Secreted frizzled related protein 1; Frizzled related protein 1; FRP 1; SARP 2; SARP-2; Secreted apoptosis related protein 2; Secreted Apoptosis-related Protein 2; Secreted frizzled related protein; Secreted Frizzled-related Protein 1; Secreted frizzled-related protein; SFRP 1; sFRP-1; SFRP1; SFRP1_HUMAN; SFRP1; FRP; FRP-1; FRP1; FrzA; SARP2. |