一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ005420 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ005420 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ005420 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-CDKN2A (Ser140)
中文名称:磷酸化抑癌基因p16抗体
别 名;p-CDKN2A/p16-INK4a(Ser140);
p-p16-INK4a(Ser140); cyclin-dependent kinase inhibitor 2A;CDK4I; p16-INK4;
p16-INK4a; cyclin-dependent kinase 4 inhibitor A; cyclin-dependent kinase
inhibitor 2A, isoform 1; Cyclin dependent kinase inhibitor 2A (p16, inhibits
CDK4); cell cycle inhibitor; cyclin-dependent kinase inhibitor 2a p16Ink4a;
cell cycle regulator; cyclin-dependent kinase inhibitor 2a p19Arf;
cyclin-dependent kinase inhibitor 2A, isoform 2; Cdkn2a; Arf; INK4A; MTS1; p16;
p16Cdkn2a; p19ARF; CD2A2_HUMAN.
产品类型;磷酸化抗体
研究领域; 信号转导
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human,
产品应用;ELISA=1:5000-10000
Flow-Cyt=3ug/Test
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;17kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human CDKN2A around the phosphorylation site of
Ser140: RG(p-S)NH
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
Acts as a negative regulator of the proliferation of normal cells by interacting strongly with CDK4 and CDK6. This inhibits their ability to interact with cyclins D and to phosphorylate the retinoblastoma protein.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
IgEELISAKit |
豚鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)elisa检测试剂盒 |
大鼠TAR DNA结合蛋白43(TARDBP)elisa分析检测试剂盒 |
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剪切和多聚腺苷酸化特异性因子5抗体 |
人胱天蛋白酶9(Casp-9)elisa分析检测试剂盒 |
NUDT21 |
鱼胰岛素受体α亚基(ISR-α)elisa分析检测试剂盒 |
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C9orf75 |
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胎盘生长因子抗体(小鼠、大鼠、猪) Anti-PLGF/PIGF (mouse, rat, pig) |
组织GRK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
磷酸激酶α1抗体 Anti-PHKA1 |
鲨鱼皮质醇(Cortisol)elisa分析检测试剂盒 |
Toll样受体1抗体 Anti-TLR1 |
Shark Cortisol ELISA Kit |
富含亮氨酸重复蛋白SHOC2抗体 Anti-SHOC2/Sur8 |
人白介素35(IL-35)elisa分析检测试剂盒 |
PE-Cy7标记的小鼠抗大鼠IgG H&L |
IL-35ELISAKit |
Mouse Anti-Rat IgG H&L / PE-Cy7 |
LAMBDA噬菌体DNA树脂纯化试剂盒 |
溶质载体家族蛋白22成员5抗体 |
磷酸化抑癌基因p16抗体N-syndecan; Sdc3; SDC3_HUMAN; SDCN; SYND3; syndecan proteoglycan 3; Syndecan-3. |