一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ012110 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ012110 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ012110 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-PKA beta (Ser339)
中文名称:磷酸化蛋白激酶Aβ抗体
别 名;PRKACB (phospho Ser339); PRKACB (phospho S339);
PRKACA (phospho Ser339); PRKACA (phospho S339); PKA alpha + beta (catalytic
subunits) (phospho S339); PKA alpha + beta (phospho S339); PKA C beta; PKACB;
PRKACB; Protein kinase cAMP dependent catalytic beta; cAMP-dependent protein
kinase catalytic subunit beta; KAPCB_HUMAN.
产品类型;磷酸化抗体
研究领域; 细胞生物 信号转导 转录调节因子 激酶和磷酸酶
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;(predicted: Human, Mouse, Rat,
Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, )
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;40kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆 细胞膜
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human PKA beta around the phosphorylation site of
Ser339: RV(p-S)IT
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
Mediates cAMP-dependent signaling triggered by receptor binding to GPCRs. PKA activation regulates diverse cellular processes such as cell proliferation, the cell cycle, differentiation and regulation of microtubule dynamics, chromatin condensation and decondensation, nuclear envelope disassembly and reassembly, as well as regulation of intracellular transport mechanisms and ion flux. Regulates the abundance of compartmentalized pools of its regulatory subunits through phosphorylation of PJA2 which binds and ubiquitinates these subunits, leading to their subsequent proteolysis.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
Gal-6SELISAKit |
环指蛋白185抗体 Anti-RNF185 |
鱼褪黑素(MT)elisa分析检测试剂盒 |
成纤维细胞核受体Nr5a2抗体 Anti-NR5A2/LRH1 |
MT ELISA Kit |
SAMD4B蛋白抗体 |
人成纤维细胞生长因子21(FGF21/UNQ3115/PRO10196)elisa分析检测试剂盒 |
SAMD4B |
人辅酶Q10(CoQ10)elisa检测试剂盒 |
锌指蛋白323抗体 Anti-ZNF323 |
HumanFGF21ELISAkit |
溶酶体相关跨膜蛋白5抗体 |
体液基质金属(MMP-8)活性比色法定量检测试剂盒 |
LAPTM5 |
大鼠谷胱甘肽S转移酶θ2(GSTθ2)elisa检测试剂盒 |
磷脂爬行酶3抗体 Anti-PLSCR3 |
鱼白介素4(IL-4)elisa检测试剂盒 |
PRPF4蛋白抗体 Anti-PRPF4 |
癌/睾丸抗原83抗体 |
丝氨酸蛋白酶抑制剂A11抗体 Anti-SERPIN A11 |
KK-LC-1/CT83 |
甲状腺过氧化物酶抗体 Anti-Thyroid peroxidase |
碳水化合物磺基转移酶12抗体 |
兔抗人球蛋白A |
CHST12 |
Rabbit Anti-Human IgA |
RPS27A抗体 Anti-RPS27A |
甘油磷酸二酯酶磷酸结构域4抗体 |
磷酸化蛋白激酶Aβ抗体Rab 17; Rab17; RAB17 member RAS oncogene family; RAB17_HUMAN; Ras related protein Rab 17; Ras related protein Rab17; Ras-related protein Rab-17; FLJ12538; OTTHUMP00000164417; OTTHUMP00000202805. |