一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ007441 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ007441 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ007441 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-Ep300 (Ser89)
中文名称:磷酸化转录接头蛋白EP300抗体
别 名;CREBBP/EP300 inhibitory protein 1; Cyclic AMP
responsive enhancer binding protein; E1A associated protein p300; E1A binding
protein p300; EC 2.3.1.48; EP300; EP300: E1A binding protein p300; RB and P300
binding protein EID 1; Histone acetyltransferase p300; p300 HAT; Retinoblastoma
protein associated protein.
交叉反应;:
Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep, GuineaPig
标记: Unconjugated
抗体来源;: Rabbit
抗体类型: Polyclonal
原: KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human Ep300 around the phosphorylation site of
Ser89
蛋白细胞定位;: 细胞核,细胞浆
纯化方法;: affinity purified by Protein
A
亚型: IgG
性状: Liquid
浓度: 1mg/ml
储存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03%
Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件;: Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
产品介绍:
Cyclic AMP-regulated gene expression frequently involves a DNA element designated the cAMP-regulated enhancer (CRE). Many transcription factors bind to this element, including the protein CREB which is activated as a result of phosphorylation by protein kinase A. It has been shown that protein kinase A-mediated CREB phosphorylation results in its binding to a nuclear protein designated CBP (for CREB-binding protein). These findings suggest that CBP has many of the properties expected of a CREB co-activator. Another high molecular weight transcriptional adapter protein, designated p300,
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38抗体 Anti-STK38 |
猪胱硫醚β合酶(CBS)elisa生化检测试剂盒 |
PE-Cy5.5标记的兔抗人IgG H&L F(ab')2 |
CBSELISAkit |
Rabbit Anti-Human IgG F(ab')₂ / PE-Cy5.5 |
Aβ1-40 ELISA Kit |
磷酸化KB抑制蛋白β抗体 |
人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)elisa生化检测试剂盒 |
tinagl1抗体 Anti-tinagl1 |
猴子β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)elisa生化检测试剂盒 |
蛋白激酶C相关激酶1抗体 |
Cpn-AbELISAKit |
HSPA7 |
小鼠S100-B蛋白(S100B)elisa检测试剂盒 |
热休克蛋白70蛋白7抗体 |
体液超氧化物阴离子荧光法定量检测试剂盒 |
PKN1 |
还原型谷胱甘肽GSH测试盒 96T 微板法 |
p53凋亡相关作用蛋白PMP22抗体 Anti-PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 |
N-苯甲酰-L-精氨酰胺盐酸盐(BAA) |
多核苷酸磷酸化酶蛋白抗体 Anti-PNPT1 |
组蛋白去甲基化酶赖氨酸MINA抗体 |
Phospho-IKB beta (Ser23) |
MINA53 |
人白介素19(IL-19)elisa生化检测试剂盒 |
双特异性磷酸酶抗体12抗体 |
HumanIL-19ELISAKit |
DUSP12 |
磷酸化转录接头蛋白EP300抗体(2-5'')oligo(A) synthase 3; 2 5' oligo(A) synthetase 3; 2 5'LIGO; 2 5A synthetase 3; 2''-5''-oligoadenylate synthase 3; 2-5A synthase 3; MGC133260; OAS3 2' 5' oligoadenylate synthetase 3, 100kDa; OAS3; OAS3_HUMAN; p100; p100 OAS; p100OAS. |