一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ011806 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ011806 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ011806 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:Phospho-NFKB p65 (Ser468)
中文名称:磷酸化细胞核因子NF-κB p65抗体
别 名;NF-kB p65 (phospho S468); p-NF-kB p65 (phospho
S468); RELA(phospho S468); NF kB P65; NF-kB p65; NFKBp65; NF-κBp65; p65 NF kappaB; p65 NFkB; NFKBp65; RELA; Transcription Factor
p65; v rel avian reticuloendotheliosis viral oncogene homolog A (nuclear factor
of kappa light polypeptide gene enhancer in B cells 3 (p65)); V Rel Avian
Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog A; v rel reticuloendotheliosis
viral oncogene homolog A (avian); v-rel reticuloendotheliosis viral oncogene
homolog A; p65NFKB; Avian reticuloendotheliosis viral (v rel) oncogene homolog
A; MGC131774; NFKB 3; NFKB3; Nuclear Factor NF Kappa B p65 Subunit; Nuclear
factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B cells 3; Nuclear Factor Of
Kappa Light Polypeptide Gene Enhancer In B Cells. NFκB-p65; NFκB p65; NF κB-p65; NFκBp65;
产品类型;磷酸化抗体
研究领域; 细胞生物 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶 通道蛋白
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, Rat, (predicted: Dog, Pig, Cow, Horse, )
产品应用;WB=1:100-200 IHC-P=1:100-500
IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1μg /test ICC=1:100
IF=1:100-200 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;61kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human NFKBp65 around the phosphorylation site of
Ser468: LA(p-S)VD
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
NF-kappa-B is a ubiquitous transcription factor involved in several biological processes. It is held in the cytoplasm in an inactive state by specific inhibitors. Upon degradation of the inhibitor, NF-kappa-B moves to the nucleus and activates transcription of specific genes. NF-kappa-B is composed of NFKB1 or NFKB2 bound to either REL, RELA, or RELB. The most abundant form of NF-kappa-B is NFKB1 complexed with the product of this gene, RELA. Four transcript variants encoding different isoforms have been found for this gene. [provided by RefSeq, Sep 2011].
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
突触结合蛋白10抗体 Anti-Synaptotagmin X |
环指蛋白190抗体 Anti-RNF190 |
磷酸化间变型瘤激酶抗体 |
突触结合蛋白4抗体 Anti-Synaptotagmin-4 |
phospho-ALK (Tyr1586) |
DEFB2 ELISA kit |
DPY19L3蛋白抗体 |
人核因子κB(NF-κB)elisa生化检测试剂盒 |
肿瘤坏死因子受体超家族成员27抗体 Anti-EDA2R |
大鼠β防御素2(DEFB2)elisa生化检测试剂盒 |
丙型肝炎病毒NS5A反式蛋白13抗体 |
HumanNF-κBELISAKit |
C9orf152 |
鱼透明质酸(HA)elisa检测试剂盒 |
9号染色体开放阅读框152抗体 |
细胞基质金属(MMP-9)活性荧光定量检测试剂盒 |
NOLC1 |
人脯氨酸肽酶(PEPD)elisa检测试剂盒 |
磷酸化蛋白酶活化受体4抗体 Anti-Phospho-PAR4 (Thr163) |
大鼠谷胱甘肽S转移酶θ1(GSTθ1)elisa检测试剂盒 |
半胱天冬酶-3酶原抗体 Anti-pro-caspase-3 |
LIM源框蛋白1抗体 |
DPY19L3 |
LIM1 |
P53应答基因蛋白5抗体 Anti-WFDC5 |
促凋亡Bik蛋白抗体 |
痛觉调节肽NPFF抗体 Anti-NPFF/FMRFamide |
Bik |
磷酸化细胞核因子NF-κB p65抗体DKFZP586H021; HT013; KIZUNA; MGC102941; MGC141930; Uncharacterized protein C20orf19; KIZ_HUMAN. |