一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ012006 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ012006 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ012006 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-PIK3R2 (Tyr467)
中文名称:磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗体
别 名;PIK3R2(phospho Y467); P85B_HUMAN;
Phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit beta; PI3-kinase regulatory
subunit beta; PI3K regulatory subunit beta; PtdIns-3-kinase regulatory subunit
beta; Phosphatidylinositol 3-kinase 85 kDa regulatory subunit beta (PI3-kinase
subunit p85-beta; PtdIns-3-kinase regulatory subunit p85-beta); PI 3 Kinase p85
beta; PI 3-Kinase p85β; PI 3-Kinase p85-β; PI 3-Kinase p85 β; PI3 kinase p85 beta
subunit; Phosphoinositide 3 kinase regulatory subunit 2 (beta); p85 beta;
p85-BETA; P85B; PI3 Kinase p85 Beta; PI
3-Kinase p85β; PI 3-Kinase p85-β; PI 3-Kinase p85 β;
产品类型;磷酸化抗体
信号转导 激酶和磷酸酶
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Rat, (predicted: Mouse, Dog, Cow, Horse, Rabbit, )
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;82kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human PIK3R2 around the phosphorylation site of
Tyr467: EE(P-Y)TR
亚
型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) is a lipid kinase that phosphorylates phosphatidylinositol and similar compounds, creating second messengers important in growth signaling pathways. PI3K functions as a heterodimer of a regulatory and a catalytic subunit. The protein encoded by this gene is a regulatory component of PI3K. Two transcript variants, one protein coding and the other non-protein coding, have been found for this gene. [provided by RefSeq, Dec 2012]
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
钾依赖钠钙交换蛋白6抗体 Anti-SLC6A19 |
RAS癌基因相关蛋白RAB7抗体 Anti-RAB7 |
螺旋环螺旋转录因子HATH6抗体 |
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神经调节蛋白4抗体 |
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KIF20A抗体 |
NRG4 |
KIF20A |
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染色质修饰蛋白CHMP6抗体 |
中分子量神经丝蛋白抗体 Anti-NF-M/Neurofilament M |
CHMP6 |
磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗体C1orf49; CA049_HUMAN; Chromosome 1 open reading frame 49; RP5-990P15.1; Testis expressed 35; Testis specific conserved gene 24kDa; TEX35; TSC24; Uncharacterized protein C1orf49. |