一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ005451 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ005451 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ005451 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-CDKN1A/p21 (Thr145)
中文名称:磷酸化p21蛋白抗体
别 名;p21 (phospho T145); p-p21 (phospho T145);
p21Cip1 (Phospho-Thr145); Activating Fragment 1; CAP20; Cation chloride
cotransporter-interacting protein 1; CDK Interacting Protein 1; CDK-interacting
protein 1; CDKI; CDKN 1; CDKN1; CDKN1A; CIP1; Cyclin Dependent Kinase Inhibitor
1A; Cyclin-dependent kinase inhibitor 1; Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A
(P21); Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (p21, Cip1); DNA Synthesis
Inhibitor; MDA 6; MDA-6; MDA6; Melanoma Differentiation Associated Protein 6;
Melanoma differentiation-associated protein 6; Melanoma
differentiation-associated protein; p21; P21 protein; p21CIP1; p21WAF; PIC1;
SDI1; SLC12A9; WAF1; Wildtype p53 Activating Fragment 1; Wildtype p53-activated
fragment 1; CDN1A_HUMAN.
产品类型;磷酸化抗体
研究领域; 信号转导 细胞周期蛋白
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, Rat,
产品应用;ELISA=1:5000-10000
IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=3ug/Test IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;18kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human CDKN1A around the phosphorylation site of
Thr145: RQ(p-T)S
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
This gene encodes a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. The encoded protein binds to and inhibits the activity of cyclin-CDK2 or -CDK4 complexes, and thus functions as a regulator of cell cycle progression at G1. The expression of this gene is tightly controlled by the tumor suppressor protein p53, through which this protein mediates the p53-dependent cell cycle G1 phase arrest in response to a variety of stress stimuli. This protein can interact with proliferating cell nuclear antigen (PCNA), a DNA polymerase accessory factor, and plays a regulatory role in S phase
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
WD重复膜蛋白19抗体 Anti-WDR19 |
蛋白质精氨酸甲基转移酶1抗体 Anti-PRMT1 |
TAP结合蛋白样抗体 |
Toll样受体5抗体 Anti-TLR5 |
Tapasin Related Protein |
Bovine IgG / Cy3 |
线粒体中间肽酶抗体 |
GPRASP1蛋白抗体 |
神经组织特异性F肌动蛋白结合蛋白2抗体 Anti-Spinophilin/Neurabin 2 |
Cy3标记牛IgG |
黑色素瘤相关抗原E2/肝细胞癌相关蛋白3抗体 |
GPRASP1 |
DCXR |
大鼠降钙素(CT)elisa生化检测试剂盒 |
羰基还原酶2抗体 |
小鼠B因子(BF)elisa生化检测试剂盒 |
MAGEE2/HCA3 |
BFELISAKit |
环指蛋白211抗体 Anti-RFPL4B/RNF211 |
CT ELISA Kit |
GSK3B相互作用蛋白抗体 Anti-Ninein/GSK3B interacting protein |
卟胆原脱氨酶抗体 |
MIPEP |
HMBS |
液泡蛋白分选受体SORCS3抗体 Anti-SORCS3 |
血管**素相关蛋白5抗体 |
蛋白激酶C nu型抗体 Anti-PRKD3 |
ANGPTL5 |
磷酸化p21蛋白抗体C15orf62; Chromosome 15 open reading frame 62; CO062_HUMAN; Hypothetical protein LOC643338; Uncharacterized protein C15orf62; Uncharacterized protein C15orf62, mitochondrial; Uncharacterized protein FLJ75552 mitochondrial. |