一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ003588 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ003588 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ003588 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:phospho-ADAM17 (Thr735)
中文名称:磷酸化CD156b抗体
别 名;ADAM17 (phospho T735); p-ADAM17 (phospho
T735); p-CD156b(phospho T735); A disintegrin and metalloproteinase domain 17;
ADAM 17; ADAM metallopeptidase domain 17; ADAM17 protein; CD 156b; CD156b;
CD156b antigen; CSVP; MGC71942; Snake venom like protease; TACE; TNF alpha
convertase; TNF alpha converting enzyme; Tumor Necrosis Factor Alpha Converting
Enzyme; A disintegrin and metalloproteinase domain 17 (tumor necrosis factor,
alpha, converting enzyme).
产品类型;磷酸化抗体
研究领域; 细胞生物 神经生物学 信号转导 干细胞 转录调节因子 新陈代谢
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, (predicted: Rat, Pig, Cow, Sheep, )
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;68/91kDa
细胞定位;细胞膜
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthesised
phosphopeptide derived from human ADAM17 around the phosphorylation site of
Thr735: PQ(p-T)PG <Cytoplasmic>
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is
intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic
applications.
Function:
Cleaves the membrane-bound precursor of TNF-alpha to its mature soluble form. Responsible for the proteolytical release of soluble JAM3 from endothelial cells surface. Responsible for the proteolytic release of several other cell-surface proteins, including p75 TNF-receptor, interleukin 1 receptor type II, p55 TNF-receptor, transforming growth factor-alpha, L-selectin, growth hormone receptor, MUC1 and the amyloid precursor protein. Also involved in the activation of Notch pathway (By similarity).
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
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乙醇福尔马林固着液(Formalin-Alcoholic) |
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7(FACTOR VII)活性荧光定量检测试剂盒 |
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大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa分析检测试剂盒 |
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大鼠髓系细胞触发受体-1 TREM-1 elisa检测试剂盒 |
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细胞核蛋白提取试剂盒100T |
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小鼠天冬酰胺合成酶(ASNS)elisa检测试剂盒 |
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大鼠激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)elisa检测试剂盒 |
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双特异性蛋白磷酸酶6重组兔单克隆抗体 DUSP6 |
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P53凋亡刺激蛋白2抗体 ASPP2 |
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