一抗操作步骤：
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭：这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合，从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点，以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉，缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1～2小时，特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜，以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育：在一抗孵育之前，需要参考一抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后，立即加入稀释好的一抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1～2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳，可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗，加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟，共洗涤3次。如果结果背景较高，可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤：洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液，其中的Tween20有助于去除非特异性的结合，减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定，建议清洗3-5次，每次5分钟。
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货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
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BJ013282 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
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BJ013282 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
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BJ013282 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性：
英文名称：phospho-A Raf (Ser214)
中文名称：磷酸化A-Raf抗体
别 名；A raf 1; A Raf proto oncogene serine/threonine
protein kinase; ARAF 1; ARAF; ARaf proto oncogene serine/threonine protein
kinase; ARAF1; Oncogene Araf1; Oncogene PKS2; PKS 2; PKS; PKS2; Proto oncogene
Pks; RAFA 1; RAFA1; Ras binding protein DA Raf; v raf murine sarcoma 3611 viral
oncogene homolog; v raf murine sarcoma 3611 viral oncogene homolog 1; v raf
oncogene homolog 1 (murine sarcoma 3611 virus); ARAF_HUMAN.
产品类型；磷酸化抗体
研究领域； 细胞生物 染色质和核信号 神经生物学 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶 G蛋白偶联受体
抗体来源；Rabbit
克隆类型；Polyclonal
交叉反应；Human, (predicted: Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse,
Rabbit, )
产品应用；ELISA=1:5000-10000
IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量；67kDa
细胞定位；细胞浆
性 状；Liquid
浓 度；1mg/ml
免 疫 原；KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human A Raf around the phosphorylation site of
Ser214: ST(p-S)TP
亚 型；IgG
纯化方法；affinity purified by Protein A
保存条件；Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项；This product as supplied is
intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic
applications.
Function:
Involved in the transduction of mitogenic signals from the cell membrane to the nucleus.
抗体注意事项：
确定抗体的名字和特性：注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息，这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型：了解你的实验类型（如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS），因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型，并不意味着该抗体不适用于该实验，只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属：确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等，因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质：了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体，特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时，这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择：单克隆抗体特异性强但亲和力相对小，而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性：原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体，避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择：封闭液的选择应根据抗体说明书进行，常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点，降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项：使用干净的孵育盒子，避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白，可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
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