一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ006734 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ006734 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ006734 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:caspase-3 p12 subunit
中文名称:活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3抗体
别 名;Caspase-3 subunit p12; cleaved Caspase 3; cleaved Caspase-3; APOPAIN; CASP3; Caspase 3 apoptosis related cysteine protease; Caspase3; CPP32; CPP32B; Cysteine protease CPP32; Human cysteine protease CPP32 isoform alpha mRNA complete cds; PARP cleavage protease; SCA 1; SCA1; SREBP cleavage activity 1; Yama; CASP3_HUMAN; Caspase-3; CASP-3; Apopain; Protein Yama; SREBP cleavage activity 1; SCA-1.
研究领域;细胞生物 信号转导 细胞凋亡
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, (predicted: Rat, Dog, Rabbit, )
产品应用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1μg /test IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;12/32kDa
细胞定位;细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human caspase-3 p12 subunit: 201-277/277
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
The caspase family of cysteine proteases play a key role in apoptosis. Caspase 3 is the most extensively studied apoptotic protein among caspase family members. Caspase 3 is synthesized as inactive pro enzyme that is processed in cells undergoing apoptosis by self proteolysis and/or cleavage by other upstream proteases (e.g. Caspases 8, 9 and 10). The processed form of Caspase 3 consists of large (17kDa) and small (12kDa) subunits which associate to form an active enzyme. Caspase 3 is cleaved at Asp28 Ser29 and Asp175 Ser176. The active Caspase 3 proteolytically cleaves and activates other caspases (e.g. Caspases 6, 7 and 9), as well as relevant targets in the cells (e.g. PARP and DFF). Alternative splicing of this gene results in two transcript variants which encode the same protein.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
APC标记人CD138 (Syndecan-1)单克隆抗体 human CD138 (Syndecan-1)/APC
IRE1蛋白抗体 IRE1
植物多酚氧化酶(polyphenol oxidase;PPO)活性比色法定量检测试剂盒
配子生成素抗体 GGN
人DNA甲基转移酶1(DNMT1)elisa分析检测试剂盒
富含半胱氨酸分泌蛋白11抗体 CRISP11
大鼠NOGO-A elisa分析检测试剂盒
钙结合蛋白重组兔单克隆抗体 Calretinin
大鼠载脂蛋白F(APOF)elisa检测试剂盒
桥粒糖蛋白2/桥粒糖蛋白3抗体 Desmocollin 2 + 3
小鼠前列腺素E2(PGE-2)elisa检测试剂盒
抑癌基因NDRG2抗体 NDRG2
动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒
原钙粘蛋白γB2抗体 PCDHGB2
饲料三聚氰胺比色法定量检测试剂盒
ZCCHC7蛋白抗体 ZCCHC7
山羊粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa检测试剂盒
维甲酸诱导蛋白1抗体 RAI1
大鼠含球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)elisa检测试剂盒
TTC33蛋白抗体 TTC33
鸭白介素4(IL-4)elisa分析检测试剂盒
细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体 CDC5L
人蛋白C(PC)elisa检测试剂盒
卷曲螺旋结构域蛋白56抗体 CCDC56
组织HSV(HERPES SIMPLX)病毒定量PCR扩增检测试剂盒
跨膜蛋白74抗体 TMEM74
HEAT重复内含蛋白7A蛋白抗体 HEATR7A
AF680标记的跨膜结构域4亚家族成员2抗体 MS4A2, Alexa Flour 680 conjugated
活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3抗体TGFB1诱导抗凋亡因子1抗体 TIAF1 研究领域;细胞生物 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 舞蹈症蛋白相互作用蛋白13抗体 HYPE 研究领域;细胞生物 神经生物学 Alzheimer's 跨膜受体蛋白Notch-3抗体 Notch3 研究领域;染色质和核信号 神经生物学 干细胞 APC标记小鼠Ly-6G/Ly-6C单克隆抗体 mouse Ly-6G/Ly-6C/APC 抗体来源;Rat