一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ012094 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ012094 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ012094 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:PKA C alpha + beta
中文名称:蛋白激酶C抗体
别 名;PKA C alpha+beta; PKA C alpha/beta; PKA C
beta; PKACB; KAPCB_HUMAN; PRKACB; Protein kinase cAMP dependent catalytic beta;
KAPCA_HUMAN; cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit alpha; PKA
C-alpha.
研究领域; 神经生物学 信号转导 转录调节因子 激酶和磷酸酶
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, Rat, (predicted: Chicken, Dog, Pig, Cow, )
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal dilutions/concentrations
should be determined by the end user.
理论分子量;40/50kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆 细胞膜
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic
peptide derived from human PKA beta: 251-351/351
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA,
0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
cAMP is a signaling
molecule important for a variety of cellular functions. cAMP exerts its effects
by activating the cAMP dependent protein kinase (AMPK), which transduces the
signal through phosphorylation of different target proteins. The inactive
holoenzyme of AMPK is a tetramer composed of two regulatory and two catalytic
subunits. cAMP causes the dissociation of the inactive holoenzyme into a dimer
of regulatory subunits bound to four cAMP and two free monomeric catalytic
subunits. Four different regulatory subunits and three catalytic subunits of
AMPK have been identified in humans. PKA beta (catalytic subunit) is a member
of the Ser/Thr protein kinase family and is a catalytic subunit of AMPK.
Mediates cAMP-dependent signaling triggered by receptor binding to GPCRs. PKA activation regulates diverse cellular processes such as cell proliferation, the cell cycle, differentiation and regulation of microtubule dynamics, chromatin condensation and decondensation, nuclear envelope disassembly and reassembly, as well as regulation of intracellular transport mechanisms and ion flux. Regulates the abundance of compartmentalized pools of its regulatory subunits through phosphorylation of PJA2 which binds and ubiquitinates these subunits, leading to their subsequent proteolysis.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
猴甲状腺素(T4)elisa分析检测试剂盒
癌/睾丸抗原58抗体 Anti-NALP4
T4 ELISA kit
小鼠抗血管内皮生长因子A抗体 Anti-VEGF-A
人反三碘甲状腺原氨酸(rT3)elisa分析检测试剂盒
Rabbit Anti-Pig
IgG H&L / Cy5.5
rT3ELISAKit
空通气孔样蛋白2抗体
MOGAT2蛋白抗体
Cy5.5标记的兔抗猪IgG H&L
小鼠破骨细胞分化因子(ODF)elisa检测试剂盒
EMX2
人白细胞抗原B27(HLA-B27)elisa检测试剂盒
人κB抑制蛋白激酶(IKK)elisa分析检测试剂盒
血液氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)活性比色法定量检测试剂盒
猪多肽YY(PYY)elisa分析检测试剂盒
大鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)elisa检测试剂盒
PYYELISAkit
MOGAT2
IKKELISAkit
双源盒蛋白4样蛋白4
大鼠谷氨酰胺合成酶(GLUL)elisa分析检测试剂盒
DUX4L4
GLUL ELISA kit
“冷”蛋白TRPM8抗体 Anti-TRPM8
豚鼠生长(GH)elisa分析检测试剂盒
畸胎瘤癌基因RAS相关抗体 Anti-RRAS2
GHELISAKit
蛋白激酶C抗体FITC标记人CD55单克隆抗体 human CD55/FITC 抗体来源;Mouse 膜相关环指蛋白8抗体 8-Mar 研究领域;细胞生物 泛素蛋白连接酶C抗体 UBE2C 研究领域;细胞生物 染色质和核信号 表观遗传学 泛素
乙酰化TRIM29蛋白抗体 TRIM29 (acetyl K116) 产品类型乙酰化抗体