一抗操作步骤：
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭：这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合，从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点，以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉，缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1～2小时，特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜，以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育：在一抗孵育之前，需要参考一抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后，立即加入稀释好的一抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1～2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳，可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗，加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟，共洗涤3次。如果结果背景较高，可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤：洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液，其中的Tween20有助于去除非特异性的结合，减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定，建议清洗3-5次，每次5分钟。
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货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
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BJ012115 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
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BJ012115 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
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BJ012115 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性：
英文名称：PRKAR1
中文名称：蛋白激酶A调节亚基a1抗体
别 名；Protein Kinase A regulatory subunit I alpha;
cAMP dependent protein kinase regulatory subunit alpha 1; cAMP dependent
protein kinase regulatory subunit RIalpha; cAMP dependent protein kinase type I
alpha regulatory chain; cAMP dependent protein kinase type I alpha regulatory
subunit; CAR; CNC 1; CNC; CNC1; DKFZp779L0468; MGC17251; PKA RIA; PKR 1; PKR1;
PPNAD 1; PPNAD1; PRKAR 1; PRKAR1; PRKAR1A; Protein kinase A type 1a regulatory
subunitv Protein kinase cAMP dependent regulatory type I alpha; Tissue specific
extinguisher 1; TSE 1; TSE1; KAP0_HUMAN.
研究领域； 细胞生物 转录调节因子 激酶和磷酸酶
抗体来源；Rabbit
克隆类型；Polyclonal
交叉反应；Mouse, (predicted: Human, Rat, )
产品应用；WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量；43kDa
细胞定位；细胞膜
性 状；Liquid
浓 度；1mg/ml
免 疫 原；KLH conjugated synthetic
peptide derived from human Protein Kinase A regulatory subunit I alpha:
101-200/381
亚 型；IgG
纯化方法；affinity purified by Protein A
缓 冲 液；0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA,
0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项；This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍：
cAMP is a signaling
molecule important for a variety of cellular functions. cAMP exerts its effects
by activating the cAMP-dependent protein kinase, which transduces the signal
through phosphorylation of different target proteins. The inactive kinase
holoenzyme is a tetramer composed of two regulatory and two catalytic subunits.
cAMP causes the dissociation of the inactive holoenzyme into a dimer of
regulatory subunits bound to four cAMP and two free monomeric catalytic
subunits. Four different regulatory subunits and three catalytic subunits have
been identified in humans. This gene encodes one of the regulatory subunits.
This protein was found to be a tissue-specific extinguisher that down-regulates
the expression of seven liver genes in hepatoma x fibroblast hybrids. Mutations
in this gene cause Carney complex (CNC). This gene can fuse to the RET
protooncogene by gene rearrangement and form the thyroid tumor-specific
chimeric oncogene known as PTC2. A nonconventional nuclear localization
sequence (NLS) has been found for this protein which suggests a role in DNA
replication via the protein serving as a nuclear transport protein for the
second subunit of the Replication Factor C (RFC40). Three alternatively spliced
transcript variants encoding the same protein have been observed. [provided by
RefSeq, Jul 2008].
Regulatory subunit of the cAMP-dependent protein kinases involved in cAMP signaling in cells.
抗体注意事项：
确定抗体的名字和特性：注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息，这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型：了解你的实验类型（如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS），因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型，并不意味着该抗体不适用于该实验，只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属：确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等，因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质：了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体，特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时，这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择：单克隆抗体特异性强但亲和力相对小，而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性：原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体，避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择：封闭液的选择应根据抗体说明书进行，常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点，降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项：使用干净的孵育盒子，避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白，可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
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