一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ008253 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ008253 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ008253 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:Factor I heavy chain
中文名称:补体因子I重链抗体
别 名;Complement factor I heavy chain; Factor I heavy chain; AHUS3; C3b INA; C3b inactivator; C3B/C4B inactivator; C3BINA; CFAI_HUMAN; CFI; Complement component I; Complement control protein factor I; Complement factor I; F1; factor I; FactorI; FI; I factor; IF; KAF; Konglutinogen activating factor; Heavy chain of factor I; OTTHUMP00000219728.
研究领域;心血管 学
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应; Human, (predicted: Mouse, Rat, )
产品应用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;35/63kDa
细胞定位;细胞外基质 分泌型蛋白
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human Complement factor I heavy chain: 261-360/582
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
The complement pathway is an important host defense system that contributes to both innate and acquired immunity. There are three pathways of complement activation: the classical pathway, lectin pathway and alternative pathway. Complement protein Factor I is a key serine protease that modulates the complement cascade by regulating the levels of C3 convertases. It circulates in plasma as a heavily N-glycosylated heterodimer made up of two disulfide linked chains, each carrying three N-linked oligosaccharide chains that may have both structural and functional roles in the interactions with the natural substrate and the cofactor during catalysis. Factor I is a serine protease with a high degree of specificity for C3b and C4b. It requires protein cofactors for cleavage of these complement proteins; Factor H, CR1 or MCP are required for C3b cleavage, and C4bp or CR1 are required for C4b cleavage.
Responsible for cleaving the alpha-chains of C4b and C3b in the presence of the cofactors C4-binding protein and factor H respectively.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
NECAP1蛋白抗体
视网膜色素上皮细胞特异性蛋白65抗体 Anti-RPE65
NECAP1
紧密连接蛋白2抗体 Anti-TJP2
6号染色体开放阅读框58抗体
HLA-DR ELISA kit
C6orf58
人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)elisa分析检测试剂盒
相似肿瘤抑制基因HUGL抗体
大鼠白细胞抗原DR(HLA-DR)elisa分析检测试剂盒
跨膜丝氨酸蛋白酶5抗体 Anti-TMPRSS5
MMP-9ELISAKit
14号染色体开放阅读框174 Anti-SAMD15/C14orf174
人NOD样受体(NLR)elisa分析检测试剂盒
泛素特异性蛋白酶OTB1抗体 Anti-OTUB1
小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)elisa分析检测试剂盒
磷酸化p21激活激酶2抗体 Anti-phospho-PAK2(Ser141)
大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa检测试剂盒
LLGL2
血液果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALD)定量检测试剂盒
DNAJA4蛋白抗体
组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2B抗体
DNAJA4
KMT2B
玻璃粘连蛋白抗体 Anti-VTN/Vitronectin
障碍自整合蛋白BAF重组兔单克隆抗体
核受体辅助抑制因子1抗体 Anti-NCoR1
BANF1
补体因子I重链抗体ERBB2/HER2重组兔单克隆抗体 ERBB2/HER2 研究领域; 细胞生物 信号转导 生长因子和 激酶和磷酸酶 细胞类型标志物 磷酸化转录调节因子CEBP β抗体 Phospho-CEBP beta (Thr235) 产品类型磷酸化抗体 导向蛋白3B抗体 Semaphorin 3B 研究领域; 发育生物学 神经生物学 血管内皮生长因子C型单克隆抗体 VEGF-C 研究领域;细胞生物 血管内皮细胞