一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ010388 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ010388 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ010388 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:KEAP1
中文名称:胞质接头蛋白Keap1抗体
别 名;Cytosolic inhibitor of Nrf2; INrf 2; INrf2; Keap 1; KEAP1; KEAP1_HUMAN; Kelch like ECH associated protein 1; Kelch like protein 19; Kelch-like ECH-associated protein 1; Kelch-like protein 19; KIAA0132; KLHL 19; KLHL19; MGC10630; MGC1114; MGC20887; MGC4407; MGC9454.
研究领域; 细胞生物 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Human, Mouse, Rat, (predicted: Dog, Pig, Cow, Rabbit, )
产品应用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;69kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human KEAP1: 65-160/624
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
This gene encodes a protein containing KELCH-1 like domains, as well as a BTB/POZ domain. Kelch-like ECH-associated protein 1 interacts with NF-E2-related factor 2 in a redox-sensitive manner and the dissociation of the proteins in the cytoplasm is followed by transportation of NF-E2-related factor 2 to the nucleus. This interaction results in the expression of the catalytic subunit of gamma-glutamylcysteine synthetase. Two alternatively spliced transcript variants encoding the same isoform have been found for this gene. [provided by RefSeq, Jul 2008].
Retains NFE2L2/NRF2 in the cytosol. Functions as substrate adapter protein for the E3 ubiquitin ligase complex formed by CUL3 and RBX1. Targets NFE2L2/NRF2 for ubiquitination and degradation by the proteasome, thus resulting in the suppression of its transcriptional activity and the repression of antioxidant response element-mediated detoxifying enzyme gene expression. May also retain BPTF in the cytosol. Targets PGAM5 for ubiquitination and degradation by the proteasome.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
钾离子通道蛋白KCNJ15抗体
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIM3抗体 Anti-PIM3
KCNJ15
泛素载体蛋白L6抗体 Anti-Ube2L6
Rho GTP酶激活蛋白36抗体
Rabbit Anti-Mouse Kappa light chain / Gold
ARHGAP36
锌指蛋白445抗体
环指蛋白166抗体
胶体金标记的兔抗小鼠k链
大鼠转铁蛋白(TF)elisa检测试剂盒
Zinc finger protein 445
大丙氨酸转氨酶(ALT)elisa检测试剂盒
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小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)elisa分析检测试剂盒
冰冻切片组织钙ATP酶PMCA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
ChATELISAKit
RNF166
C3bR ELISA Kit
果蝇CG6856-PA抗体
海狮皮质醇(Cortisol)elisa分析检测试剂盒
CG6856-PA
Sea Lion Cortisol ELISA kit
促黄体诱导蛋白5抗体 Anti-STARD5
人胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)elisa分析检测试剂盒
磷酸化蛋白磷酸酶2A(PP2Aα)抗体 Anti-phospho-PP2A alpha(Tyr307)
CCKELISAKit
胞质接头蛋白Keap1抗体肌微管素相关蛋白3抗体 MTMR3 研究领域;细胞生物 信号转导 激酶和磷酸酶 20号染色体开放阅读框14抗体 C20orf14 研究领域;细胞生物 染色质和核信号 表观遗传学 糖蛋白VI/六糖蛋白抗体 Glycoprotein VI 研究领域;心血管 RNF4单克隆抗体 RNF4 研究领域;染色质和核信号 表观遗传学 泛素