一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ009325 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ009325 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ009325 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:H2-D1
中文名称:I类组织相容性H-2抗原D-Dalpha链抗体
别 名;H-2Dd; H-2 class I histocompatibility antigen,
D-D alpha chain; H-2D(D); H-2D; H2-D; H2-K1; HA12_MOUSE.
研究领域;细胞生物
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应; Mouse,
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;39kDa
细胞定位;细胞膜
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic
peptide derived from mouse H-2Dd: 51-150/365 <Extracellular>
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA,
0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
Predicted to enable
several functions, including 14-3-3 protein binding activity; TAP binding
activity; and signaling receptor binding activity. Acts upstream of or within
antigen processing and presentation of endogenous peptide antigen via MHC class
I via ER pathway, TAP-dependent; negative regulation of neuron projection
development; and positive regulation of T cell mediated cytotoxicity. Located
in external side of plasma membrane. Colocalizes with membrane raft. Is
expressed in several structures, including alimentary system; brain; early
conceptus; genitourinary system; and hemolymphoid system gland. Human
ortholog(s) of this gene implicated in several diseases, including asthma
(multiple); autoimmune disease (multiple); eye disease (multiple); human
immunodeficiency virus infectious disease (multiple); and inner ear disease
(multiple). Orthologous to several human genes including HLA-A (major
histocompatibility complex, class I, A); HLA-B (major histocompatibility
complex, class I, B); and HLA-C (major histocompatibility complex, class I, C).
[provided by Alliance of Genome Resources, Nov 2021]
Involved in the presentation of foreign antigens to the immune system.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
公司正在销售的产品:
地中海热蛋白MEFV抗体
核苷酸还原酶M2B抗体 Anti-p53R2/RRM2B
MEFV
微管蛋白抗体(组化用抗体)Tubulin β Anti-Tubulin-Beta
1号染色体开放阅读框111抗体
Mouse IgG / AF647
C1ORF111
mRNA cap甲基转移酶抗体
腱糖蛋白X抗体
Alexa Fluor 647标记小鼠IgG(型对照)
分子伴侣复合体TCP-1α抗体 Anti-TCP1 alpha
HCM
VWCE抗体 Anti-VWCE
大鼠活化蛋白C(APC)elisa分析检测试剂盒
神经细胞正五聚体1抗体 Anti-NPTX1/NP1
兔降钙素原(PCT)elisa分析检测试剂盒
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亚单位2抗体 Anti-RAB3GAP2
PCTELISAKit
TNXB
APC ELISA Kit
Y染色体开放阅读框15B抗体
人血清抗体
CYorf15B
human serum
锌指转录因子Slug抗体 Anti-SNAI2/SLUG
gp130结合蛋白GAM抗体
成骨相关转录因子抗体 Anti-Osterix
AES
I类组织相容性H-2抗原D-Dalpha链抗体细小清蛋白抗体 Parvalbumin 研究领域;神经生物学 白介素20受体α链抗体 IL-20R alpha 研究领域;细胞生物 细胞膜受体 细胞表面分子 Crk p38抗体 CRK 研究领域; 磷酸化核因子2相关因子2(Ser40)重组兔单克隆抗体 phospho-Nrf2 (Ser40) 产品类型磷酸化抗体 重组兔单抗