一抗操作步骤:
一抗的操作步骤主要包括封闭、一抗孵育和洗涤。
封闭:这一步骤的目的是为了防止非特异性的蛋白质结合位点与抗体结合,从而引起非特异的染色和背景。通常使用惰性蛋白质或非离子去污剂来封闭膜上的未结合位点,以降低抗体的非特异性结合。常用的封闭试剂有5%的BSA或脱脂奶粉,缓冲液一般选择PBST或TBST。封闭条件通常为室温或37℃缓慢摇动1~2小时,特殊情况也可4℃过夜。封闭完成后需要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂。
一抗孵育:在一抗孵育之前,需要参考一抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释一抗。吸尽封闭液后,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。如果一抗孵育一小时效果不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。然后回收一抗,加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟,共洗涤3次。如果结果背景较高,可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
洗涤:洗涤的目的是为了洗去一抗的非特异性结合,洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。建议使用PBST或TBST作为洗涤液,其中的Tween20有助于去除非特异性的结合,减少背景。洗涤的次数和时间根据具体实验来确定,建议清洗3-5次,每次5分钟。
货号 |
规格 |
价格 |
用途 |
BJ008074 |
50ul |
1380 |
仅供科研实验 |
BJ008074 |
100ul |
2380 |
仅供科研实验 |
BJ008074 |
200ul |
3480 |
仅供科研实验 |
商品属性:
英文名称:FBXL21
中文名称:FBXL21蛋白抗体
别 名;F box and leucine rich repeat protein 21; F
box and leucine rich repeat protein 3 pseudogene; F box and leucine rich repeat
protein 3B; F box protein Fbl3b; F box/LRR repeat protein 21; F box/LRR repeat
protein 3B; Fbl 21; FBXL 21; FBXL-21; FBL 3; FBL 3B; Fbl21; FBL3; FBL-3B; FBL
3B; FBL3B; FBXL 21; FBXL 3B; FBXL 3P; FBXL3B; FBXL3P; MGC120237; FXL21_HUMAN.
研究领域;细胞生物 细胞周期蛋白
抗体来源;Rabbit
克隆类型;Polyclonal
交叉反应;Mouse, (predicted: Human, Rat, Dog, Cow, Sheep, )
产品应用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理论分子量;49kDa
细胞定位;细胞核 细胞浆
性 状;Liquid
浓 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic
peptide derived from human FBXL21/FBL3B: 121-220/300
亚 型;IgG
纯化方法;affinity purified by Protein A
缓 冲 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA,
0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事项;This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍:
FBL3B is a 434 amino acid protein encoded by the human gene FBXL21. FBL3B contains one 40 amino acid F-box region, making it a member of the F-box family. FBL3B also contains three LRR (leucine-rich) repeats. F-box proteins are critical components of the SCF (Skp1-CUL-1-F-box protein) type E3 ubiquitin ligase complex and are involved in substrate recognition and recruitment for ubiquitination. F-box proteins are members of a large family that regulates cell cycle, immune response, signaling cascades and developmental programs by targeting proteins, such as cyclins, cyclin-dependent kinase inhibitors, IkB-a and b-catenin, for degradation by the proteasome after ubiquitination. FBL3B is a substrate-recognition component of the SCF complex that interacts with Skp1 p19 and CUL-1. FBL3B is also associated with expression and regulation of circadian and cryptochrome proteins.
抗体注意事项:
确定抗体的名字和特性:注意抗体的中英文名字、它名、亚型等信息,这些信息对于选择正确的抗体至关重要。
明确实验类型:了解你的实验类型(如ELISA、WB、IHC、ICC或FACS),因为抗体的说明书通常会列出该抗体经验证过的实验类型。如果说明书没有提及某种应用类型,并不意味着该抗体不适用于该实验,只是表示尚未经过该实验验证。
选择适当的实验样本种属:确定你的实验样本是来自人类、小鼠还是大鼠等,因为抗体的说明书会列出该抗体经试验验证过的物种。
考虑样本蛋白的结构性质:了解样本蛋白的结构性质有助于选择的抗体,特别是当样本蛋白在提取和处理过程中可能会变性时,这会影响抗体的亲和反应。
单多克隆抗体的选择:单克隆抗体特异性强但亲和力相对小,而多克隆抗体特异性稍弱但亲和力强。根据实验需求选择合适的抗体。
注意抗体的特异性:原的类型对抗体对靶蛋白的特异性有显著影响。应选择针对已充分表征的原产生的抗体,避免使用不合适或质量差的原产生的抗体。
封闭液的选择:封闭液的选择应根据抗体说明书进行,常用的封闭液包括脱脂奶粉和BSA。封闭液的目的是封闭非特异性结合位点,降低背景噪音3。
抗体孵育注意事项:使用干净的孵育盒子,避免油脂等杂物沾到膜上造成非特异信号。如果一次性需要检测多个蛋白,可以考虑将膜剪开或采用其他技术如抗体洗脱液处理后再次使用膜
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